【产品名称】

通用名称：戊型肝炎病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【包装规格】

48 人份/盒，96 人份/盒。

【预期用途】 

本产品用于体外定性检测人血清中戊型肝炎病毒IgG抗体。

实验结果仅供临床参考，不作为临床诊治的唯一依据，可作为戊型肝炎病毒感染的辅助诊断。

背景信息介绍：

戊型肝炎病毒（HEV）大小约27～34nm的单股正链无包膜的RNA病毒，基因组全长约7.5kb，含3个开放读码框架（ORF），ORF1编码与病毒复制有关的功能性蛋白，ORF2与ORF3推测编码病毒的结构蛋白。其中ORF2 C端编码病毒主要结构蛋白，集中了主要的抗原位点。研究者们通过对合成肽抗原及重组抗原的研究发现了多个抗原表位，研究表明，ORF2重组抗原与合成肽抗原在ELISA方法检测HEV抗体已用于临床诊断。

戊型肝炎(简称戊肝) 由戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus, HEV）感染所致。急性临床型戊型肝炎的病死率高于甲型肝炎和乙型肝炎，主要流行于发展中国家,尤其是妊娠妇女感染HEV后其病死率可高达20%,后3个月的妊娠妇女晚期者最高可达56%。大量资料研究表明，戊肝是一种人畜共患传染病。戊型肝炎是本世纪80年末发现的新的病毒性肝炎之一，全球流行，广泛见于亚洲、非洲与拉丁美洲地区。我国是病毒性肝炎高发区，据统计，在急性病毒性肝炎中，戊型肝炎发病率为3.4％～20.5％，平均为8.6％。

GENELABS®戊型肝炎病毒IgM、IgG ELISA检测试剂盒是唯一获得国家药品进口注册证书的戊型肝炎病毒检测进口试剂。 GENELABS的HEV IgM、IgG试剂盒采用酶联免疫吸附法，利用戊型肝炎病毒基因组特定的有共性的基因片段来分别检测人体血清或血浆中抗HEV IgM、IgG。这种标志物的重组基因片段成功地应用在不同的地方性流行区域的急性戊型肝炎感染的诊断。血清学HEV IgM、IgG检测是诊断戊型肝炎病毒感染的重要指标之一。

【检验原理】

本品由基因重组表达的戊型肝炎病毒（HEV）抗原包被微孔板，加待测血清, 当待测样品中存在戊型肝炎病毒抗体，则形成抗原抗体特异结合，再加入抗人IgG酶结合物与其反应，经酶底物显色，在酶标仪上测定根据OD值判定有无戊型肝炎病毒 IgG抗体的存在。

【主要组成成分】

各组份组成：（1）戊型肝炎病毒抗原微孔板：用基因重组表达的戊型肝炎病毒1和4型的ORF2，ORF3表位抗原混合包被聚乙烯微孔板；（2）酶结合物：50%小牛血清，15%山羊血清，0.1%硫柳汞，0.01M磷酸盐缓冲液(pH7.4)；（3）阳性对照：戊型肝炎病毒IgG抗体检测为阳性血清；（4）阴性对照：戊型肝炎病毒IgG抗体检测为阴性血清；（5）洗涤液：磷酸盐缓冲液-0.5‰吐温20；（6）显色剂 A：柠檬酸8.00g ,过氧化尿素0.70g; （7）显色剂B：柠檬酸2.10g，乙二胺四乙酸0.38g，3,3',5,5'-四甲基联苯胺 0.40g；（8）终止液：2M  H₂SO₄；（9）样品稀释液：0.24%三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液，1.78%NaCl，0.5%酪蛋白钠，0.2%牛血清白蛋白，0.1%吐温-20，0.1%曲拉通X-100，5%山羊血清，0.1%硫柳汞。

【储存条件及有效期】 

试剂盒应置2~8℃中避光保存，有效期12个月。未用完的包被微孔板条应加入干燥剂用自封袋密封后与剩余的试剂放置2~8℃保存，一周内用完。常温运输5天不影响其稳定性。

生产日期及有效期见标签。

【适用仪器】

酶标仪：检验波长450nm，参考波长630nm

【样本要求】  

1、样本采集不需要特殊准备，按照正常的采血技术收集血液，全血样品最好先放置37℃处理2小时，再将血样品充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清不含或极少含血细胞。如果为抗凝血样品，应将血样品充分离心后，最好再放置室温2小时以上。

2、样本可使用血清，柠檬酸、肝素或EDTA等抗凝剂不会影响实验结果。

3、样本中含用叠氮钠会影响实验结果，高度溶血的样本，没完全收缩的血清样本或微生物污染的样本可能会引起错误的结果。

4、新鲜的样本在2~8℃下保存一星期，新鲜样本可长期储存在-20℃或以下，避免反复冻融。

【检验方法】 

1、实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将浓缩洗涤液作1:20稀释。

2、加待测样本：每次实验设阴性对照、阳性对照各两孔，分别加入阴、阳性对照血清各100μL，再设一孔空白对照，加样品稀释液100μL。其余孔加入100μL样品稀释液，再加待测血清10μL。充分混匀后，置37℃温育30分钟。弃去孔内样本，扣干。

3、洗板：（1）手工洗板：弃去微孔板条孔内液体，在吸水纸上拍干；用洗涤液注满每孔，静置5~10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。

（2）洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，洗液应注满每孔，并确保每次吸净无残留，最后在吸水纸上拍干。

4、加入酶结合物：每孔加100μL，空白对照孔不加，充分混匀，贴上粘纸置37℃温育20分钟。

5、洗板：同3。

6、加显色剂：先加入显色剂A液50μL ，再加入显色剂B液50μL，充分混匀，放置37℃ 避光温育10分钟。

7、终止反应：每孔加终止液50μL，混匀。

8、测定：用酶标仪读数，可选用单波长450nm(以空白孔校零)或450/630nm，读取各孔OD值。读数须在终止后10分钟内完成。

【阳性判断值】

Cutoff 值计算：COV=阴性对照平均OD值＋0.12 。

标本OD值≥COV为阳性；标本OD值

注：阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

【检验结果的解释】

1、阴性结果表明样本中不含有戊型肝炎病毒IgG抗体，或样本中的戊型肝炎病毒IgG抗体含量低于试剂盒的检测范围。

2、阳性结果表明样本中含有戊型肝炎病毒IgG抗体，或非特异反应素。

3、阳性结果的样本需要进行重复实验，只有经过重复或再重复实验仍为阳性结果的样本，可认为是戊型肝炎病毒IgG抗体阳性。所有重复结果为阳性的样本应经过适当的手段进行确认。

阳性结果的样本如复检为阴性结果应被认为是阴性样本，重复不出现阳性结果可能属于以下一个或多个技术问题引致：

1） 由于仪器或加样器造成的交叉污染。

2） 显色剂被金属离子污染。

3） 由于试剂滴漏造成的交叉污染。

4） 不充分的洗板或最后吸去不彻底。

4、试剂存在假阴性、假阳性发生的可能性。敏感性93.8%、特异性94.4%。

【试验方法的局限性】 

本品仅用于检测血清中戊型肝炎病毒IgG抗体，用于体外检测，临床辅助诊断。

【产品性能指标】

1.试剂外观为澄清透明液体，无絮状沉淀物。

2.用10份戊型肝炎病毒抗体（IgG）阴性参考品检测，应全部检出。

3.用10份戊型肝炎病毒抗体（IgG）阳性参考品检测，应全部检出。

4.用4份戊型肝炎病毒抗体（IgG）灵敏度参考品检测，S1、S2、S3 应为阳性；S4为阴性。

5.用1份戊型肝炎病毒抗体（IgG）精密性参考品检测，CV（%）应不高于15％（n=10）。

6.稳定性实验：试剂各组分置37℃至少6天，检定结果应达到标准。

7.装量：≥标示装量。

8.高脂、溶血、黄疸等干扰因子对检测结果影响：甘油三酯浓度为2.1mmol/L，(正常值：0.22~1.65mmol/L)，血红蛋白浓度为210g/L，(正常值：110~170g/L), 胆固醇浓度为8.5 mmol/L，(正常值:2.6~6.5mmol/L)均不影响本品检测结果。

9.与其他病原体的交叉反应研究:HAV16例、HBV23例、HCV24例、HIV26例、TORCH 18例进行交叉反应试验结果表明，均不影响本品的检测结果。

10.临床对比研究的信息简介：将研究试剂与国家批准的戊型肝炎病毒IgG抗体检测试剂对临床标本进行对比检测，比较其敏感性、特异性等方面的等效性。

本项目样本总量的确定依据：根据《体外诊断试剂注册管理办法》的规定，本次研究产品按产品分类为第三类。根据《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》，临床研究总样本数为1314例。对比研究结果：敏感性93.8%;特异性94.4%;样本符合率94.1%。

【注意事项】

1、 本品仅用于体外诊断，仅限于检测人体血清，检测结果仅供临床参考，不作为临床诊治的唯一依据。

2、 从2~8℃条件下取出的样本应置室温平衡30分钟再进行检测。

3、 须确保样品加样量的准确，如果加样不准确，可能会导致错误的实验结果。

4、 使用微量移液器手工加样时，每次应该更换吸头吸取样本。

5、 用滴瓶滴加时，请将瓶中液体摇匀，并弃去1~2滴后垂直匀速地滴加。要避免将组份中的液体触到或溅到微孔板边缘上，特别是酶结合物。

6、 在操作过程中应尽量避免反应微孔中产生气泡。

7、 浓缩洗涤液系高浓度磷酸盐，可能会形成结晶，如未完全溶解，会影响实验结果，同时可能会堵住自动加样器或洗板机管道。若出现结晶，请放置37℃充分溶解，然后稀释混匀使用。

8、 封板胶纸不能重复使用。

9、 用水浴锅反应时，请将反应板浸放于水中1/3，底部以网格支撑物支撑，水温控制在37℃。

10、洗板：1）以洗板机洗板时，洗板机的加液量至关重要，既避免洗液过量溢出，又能充满反应微孔中，洗板次数不应该少于5次，并经常注意检查加液头是否堵塞。

2）手工洗板时，请勿使用带纸屑的吸水材料拍板，以防外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物质与显色剂发生反应，影响检测结果的准确性。

3）洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。

4）洗板机最好在每次使用前、后，用蒸馏水或去离子水清洗干净，以防止管道堵塞或腐蚀。

11、如使用全自动酶标分析系统，可能会存在系统的误差，应对系统参数设定做适当调整，以满足国家相关质控品要求。

12、如果有任何试剂接触皮肤和眼睛，必须用大量清水对该部位进行扩大清洗和消毒；终止液为硫酸，具有腐蚀性。

13、试剂盒内有关组份及临床样本均视为有潜在传染性，请按相关的实验室工作规范来执行和处理。

【参考文献】

1.《临床实验室参考范围的定义和确定》

2. 2006年东南大学出版社出版的《全国临床检验操作规程》第三版

3.《临床化学体外诊断试剂（盒）通用技术要求》

医疗器械生产企业许可证编号：

【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】 

【说明书核准日期及修改日期】